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超级抗菌酶是指髄过氧化物酶，由于其能对耐药性极强的超级细菌有杀灭作用且具有安全无副作用、无耐药性、抗菌谱广的特点，因此该产品将成为二十一世纪的青霉素，谁拥有这一产品谁将主宰抗生素市场。 本项目是长沙3635人才项目，由赢润生物采用独特的细胞表达系统及培养体系，体外大量生产人重组髓过氧化物酶（rMPO），并建立了大规模生产以及纯化的工艺体系，是全世界唯一用基因工程方法规模化生产人重组MPO药物的项目。 本项目的各项技术指标包括浓度、纯度、活力等质量标准均处于国际领先水平，相关技术已发表科技论文40余篇。 该项目临床前的细胞及动物抗菌试验均已完成、研发路线图及生产工艺已完成验证。开发合作单位包括湖南师范大学、湖南省人民医院、中南大学湘雅医院、湘雅二医院（均为国家三甲医院），为SFDA指定的临床试验医疗机构，具有丰富的新药临床试验经验。
前期技术研究的基础（部分原始数据） （1）成功构建rMPO稳定表达的细胞株，建立rMPO生产及纯化的工艺路线，经生产的rMPO纯度可达95%以上，见图1
图1. 生产和纯化重组MPO。 MPO-稳定表达的细胞株高效表达rMPO，其培养基的上清液用于色谱纯化。纯化的rMPO是经SDS-PAGE凝胶电泳并经考马斯亮蓝染色。箭头表示rMPO蛋白，纯度达95%以上。 （2）重组rMPO与天然MPO的酶活性基本相似。提取人体内天然的MPO，与本项目生产系统制备的重组rMPO进行活性比较，结果显示两者的酶活基本相似，且重组rMPO酶活性稍微高些，见图2。
图2. 比较天然MPO和重组MPO的酶活性。 结果显示两者活性相似，重组MPO活性稍微高些。 （3）重组rMPO具有较强的杀微生物活性，较低浓度（3-5nM）MPO即可完全杀灭细菌及霉菌，并对耐药性细菌具有杀伤作用。本项目前期试验检测了rMPO对大肠杆菌（图3A）、白色念球菌（图3B）、金黄色葡萄球菌和耐药性金黄色葡萄球菌（图3C）、绿脓杆菌（图3D）的杀灭作用，效果理想。 A.
B.
C.
D.
图3. 重组MPO杀微生物活性 A. 重组MPO杀死大肠杆菌实验。 B. 重组MPO杀白色念珠菌实验。C. 金黄色葡萄球菌和耐药性金黄色葡萄球菌。D. 绿脓杆菌。微生物与rMPO，20μMH2 O2和/或140mM的氯离子混合并在37℃ 1小时。然后细胞涂布在LB琼脂平板上，分别在37℃培养过夜。结果显示3-5nM rMPO能完全杀灭细菌和霉菌。 （4）动物毒理学试验显示，rMPO在100nM时对鼠的体重、体温、和白细胞数均无显著影响，说明rMPO对小鼠无毒性作用。
图4.动物毒理学试验。 小鼠分三组,对照组静脉注射磷酸缓冲液，实验组静脉注射100nM rMPO或者100nM rMPO + H2O2。分别观察体重（A），体表温度（B）以及白血细胞数（C）。结果显示rMPO在100nM时对鼠无毒性作用。 （5）动物治疗性试验。注射7.5x106绿脓杆菌于小鼠气管诱导实验性肺炎。冶疗组同时注射100nM 重组MPO和50μM H2O2，对照组仅注射磷酸缓冲液。观察动物生存率。结果表明对照组小鼠全部在56小时内死亡，治疗组仅1个小鼠100小时死亡，其余恢复健康。n=300。
图5. 实验性治疗绿脓杆菌性肺炎。 |
