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超级抗菌酶

  

  超级抗菌酶指髄过氧化物酶,由于其能对耐药性极强的超级细菌有杀灭作用且具有安全无副作用、无耐药性、抗菌谱广的特点,因此该产品将成为二十一世纪的青霉素,谁拥有这一产品谁将主宰抗生素市场。

  本项目是长沙3635人才项目,由赢润生物采用独特的细胞表达系统及培养体系,体外大量生产人重组髓过氧化物酶(rMPO),并建立了大规模生产以及纯化的工艺体系,是全世界唯一用基因工程方法规模化生产人重组MPO药物的项目。

  本项目的各项技术指标包括浓度、纯度、活力等质量标准均处于国际领先水平,相关技术已发表科技论文40余篇。

  该项目临床前的细胞及动物抗菌试验均已完成、研发路线图及生产工艺已完成验证。开发合作单位包括湖南师范大学、湖南省人民医院、中南大学湘雅医院、湘雅二医院(均为国家三甲医院),为SFDA指定的临床试验医疗机构,具有丰富的新药临床试验经验。

  




前期技术研究的基础(部分原始数据)

1)成功构建rMPO稳定表达的细胞株,建立rMPO生产及纯化的工艺路线,经生产的rMPO纯度可达95%以上,见图1

1. 生产和纯化重组MPO

MPO-稳定表达的细胞株高效表达rMPO,其培养基的上清液用于色谱纯化。纯化的rMPO是经SDS-PAGE凝胶电泳并经考马斯亮蓝染色。箭头表示rMPO蛋白,纯度达95%以上。


2重组rMPO与天然MPO的酶活性基本相似。提取人体内天然的MPO,与本项目生产系统制备的重组rMPO进行活性比较,结果显示两者的酶活基本相似,且重组rMPO酶活性稍微高些,见图2




2. 比较天然MPO和重组MPO的酶活性。

结果显示两者活性相似,重组MPO活性稍微高些。


3重组rMPO具有较强的杀微生物活性,较低浓度(3-5nMMPO即可完全杀灭细菌及霉菌,并对耐药性细菌具有杀伤作用。本项目前期试验检测了rMPO对大肠杆菌(图3A)、白色念球菌(图3B)、金黄色葡萄球菌和耐药性金黄色葡萄球菌(图3C)、绿脓杆菌(图3D)的杀灭作用,效果理想。

A.



B.

C.

D.

3.   重组MPO杀微生物活性

A. 重组MPO杀死大肠杆菌实验。 B. 重组MPO杀白色念珠菌实验。C. 金黄色葡萄球菌和耐药性金黄色葡萄球菌。D. 绿脓杆菌。微生物与rMPO20μMH2 O2/140mM的氯离子混合并在37 1小时。然后细胞涂布在LB琼脂平板上,分别在37培养过夜。结果显示3-5nM rMPO能完全杀灭细菌和霉菌。

4动物毒理学试验显示,rMPO100nM时对鼠的体重、体温、白细胞数均无显著影响,说明rMPO对小鼠无毒性作用。


4.动物毒理学试验。

小鼠分三组,对照组静脉注射磷酸缓冲液,实验组静脉注射100nM rMPO或者100nM rMPO + H2O2。分别观察体重(A),体表温度(B以及白血细胞数(C。结果显示rMPO100nM时对鼠无毒性作用。


5动物治疗性试验。注射7.5x106绿脓杆菌于小鼠气管诱导实验肺炎。冶疗组同时注射100nM 重组MPO50μM H2O2,对照组仅注射磷酸缓冲液。观察动物生存率。结果表明对照组小鼠全部在56小时内死亡,治疗组仅1个小鼠100小时死亡,其余恢复健康。n=300




5. 实验性治疗绿脓杆菌性肺炎。